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產品編號：SR706

制品內容（25μl反應×50次量）

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2×Premix for PCR *1                   1 ml

Primer Mix for Asinine*2               50 μl

dH₂O                                   1 ml

Control DNA for Asinine                50 μl

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*1   2×Premix for PCR中含有dNTP、Buffer、Taq酶等。

*2   Primer Mix for Asinine中含有擴增用引物。

保存：-20℃

制品說明

本制品是利用PCR技術快速檢測驢線粒體DNA的試劑盒。應用PCR技術，根據線粒體基因上動物種間的多態性的
差異進行驢源性成分鑒定。利用特異性擴增驢源性成分的引物對樣品模板DNA進行PCR擴增,并分別在實驗中設
立陰性對照和陽性對照反應。制品中2×Premix for PCR已經將DNA聚合酶、反應用Buffer、dNTP等試劑預混在
一起。試劑盒采用獨特的PCR反應用Buffer和DNA聚合酶,可以有效抵制非特異性的PCR擴增，大大提高了PCR的
擴增效率。本檢測簡單快速，靈敏度高、特異性強。本制品適用于食品和飼料等樣品中驢源性成分的鑒別。

實驗操作

A  樣品DNA提取：

1．取樣：按采樣要求，取8-10g原樣品在滅菌研缽中。

2．研磨：加入適量TE溶液，充分研磨樣品至微小顆粒狀，轉移至數個滅菌EP管中。

3．提取核酸：按市售的DNA核酸提取試劑盒的說明方法提取樣品總DNA。

B  PCR反應

按下列組份配置PCR反應液。

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2×Premix for PCR                   18μl

Primer Mix for Asinine             1μl

樣品DNA  *                                 5μl

dH2O                               up to 25μl

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*  Negative Control 反應時，用dH2O替代樣品DNA; Positive Control 反應時，用Control DNA for Asinine
替代樣品DNA。

C  凝膠電泳檢測試驗：

將PCR擴增產物于1.5％瓊脂糖凝膠上進行電泳試驗。

按下列條件進行PCR反應:

    94℃                2  min        1 Cycle

   94℃               15  sec     40 Cycles

   68℃               30  sec     40 Cycles

   72℃               30  sec     40 Cycles

   72℃                 5  min      1 Cycle

質量控制

以下條件有一條不滿足時，實驗視為無效：

a)       空白對照：無PCR擴增產物條帶。

b)       陰性對照：在226bp大小處未見PCR擴增條帶。

c)       陽性對照：在226bp大小處可見PCR擴增條帶。

結果判斷與表述

A  結果判定

在符合質量控制的情況下，被檢樣品在226bp大小處可見PCR擴增條帶則判為可疑陽性；在226bp大小處未見
PCR擴增條帶則判為陰性。

將可疑陽性的PCR擴增產物進行核酸序列測定，與驢線粒體細胞色素C氧化酶Ⅲ基因相對應片段的序列比對，
其片段大小正確，同源性達到97%以上，則確證含有驢成分。

B  結果表述

結果為陰性者，表述為“未檢出驢成分”。